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Ich darf euch mit Freude mitteilen, dass es mir gelungen ist einen A. titanum aus einem Blattsegment zu vermehren. Er hat zwar noch keine Wurzeln, aber nach sechs Wochen sieht er schon recht vielversprechend aus.

Gruß
Andreas

Na klar lass ich euch teilhaben.

Die Idee kam mir als ich von dem Kohlenbach Versuch gehört habe. Der Bericht findet sich in Acta horticulturae, Heft 226 von 1988, falls das jemand nachlesen möchte. Nach meinem Wissen war das die erste erfolgreiche Vermehrung eines A. titanum in Nährmedium über Blattstecklinge. Ich habe seine Versuche aber nur als Anhaltspunkt genommen und ein anderes Medium gewählt.

Dies war mein erster Versuch, daher lief auch nicht alles so perfekt ab.

Als Medium diente ein MS Medium mit 1.0 BAP und Agar.

Alle Explanate stammen von meinem im Oktober ausgesäten A. titanum. 15 Habe ich vom ersten Blatt genommen und 7 vom zweiten Blatt. Dafür habe ich zwei Segmente des ersten und ein Segment des zweiten benutzt. Die Blätter wurden zunächst in Alkohol und danach in Natriumhypochlorit desinfiziert. Danach habe ich nur die Mittelrippen mit ca 1 cm Blatt auf den Seiten verwendet.

Die Sterilisierung hat gut funktioniert. Von den 22 Explanaten waren anschließend nur zwei kontaminiert. Im Kohlenbach Versuch blieben von ca 200 Explanaten nur ca 50 unkontaminierte übrig, so dass ich mit meiner Quote durchaus zufrieden bin.

Allerdings waren scheinbar meine Gläser nicht sauber genug, so dass anschließend nochmal sieben Explanate kontaminiert waren. Ich vermute es lag daran, dass ich das Nährmedium in saubere aber unsterilisierte Gläser gefüllt und dann gemeinsam sterilisiert habe, indem ich es in der Mikrowelle erhitzt und für 2 Minuten gekocht habe. Scheinbar haben dabei am Glas Schimmelsporen überlebt.

Der Unterschied zu den beiden ersten war, dass hier die Kontamination an der Grenze zwischen Glas und Medium stattfand, und nicht ausgehend vom Explanat. Beim nächstenmal werde ich also die einzelnen Gläser auch noch sterilisieren bevor ich Medium einfülle und dann nochmal gemeinsam mit dem Medium.

Zum Setup kann ich sagen, dass ich ein einem geschlossenen Raum gearbeitet habe. Ich habe zunächst mit einem Sprüher im ganzen Raum Wasser gesprüht, um möglichst viel Staub zu binden. Den Tisch und alle Instrumente mit denen ich gearbeitet habe, habe ich mit Alkohol abgewaschen. Als "Clean Box" Habe ich einfach eine IKEA Samla Box genommen, die ich auf den Kopf gestellt habe und ein Loch zum Arbeiten in die Seite geschnitten.

Zum Thema Bewurzeln bin ich noch nicht sicher. Ich denke gerade darrüber nach, ob ich mein Explanat teile und davon Subkulturen anlege und dann diese bewurzele. Ich lese mich gerade nochmal durch das Thema Hormone in diversen Micropropagagation Büchern, um herauszufinden, welche Hormonkombination ich sinnvollerweise für die Subkulturen verwende. Die müssen ja in Schritt eins wachsen, in Schritt zwei einen Austrieb bilden und in Schritt drei bewurzelt werden.

Es sieht übrigens so aus, dass das Blatt nicht zu alt sein darf. Die Explanate des ersten Blattes, welches zu Beginn des Versuches ca 5 Monate alt war, welken alle bis auf eins. Die Explanate des jüngeren Blattes sehen velversprechender aus.

Auf jeden Fall ein spannendes Thema. Ich werde demnächst noch Versuche mit meinen anderen Arten machen. Wenn ich fertig bin, werde ich das Setup nochmal ausführlicher beschreiben, damit andere es nachmachen können.

Worin lag denn dein Problem, dass zu weniger Erfolg führte? Und wo hast du deine Hormone und anderes gekauft?

Vom Agar habe ich immer zwei Messlöffel genommen, ich meine es waren die amerikanischen "pinch" pro Glas. Theoretisch waren die Gläser mit 45 ml gefüllt. Da ich aber keinen passenden Messbecher hatte, habe ich die halt nach Auge etwa gleich gefüllt. Bei einigen war das Agar dann auch sehr hart für die Blätter. Bevor ich einen neuen Versuch starte, werde ich mir erstmal einen passenden Messbecher kaufen.

Vom Natriumhypochlorit habe ich mir einen Kanister mit einer ich glaube 13% Lösung gekauft, den ich dann 1:10 verdünnt habe. Wie lang sie drin waren kann ich dir grad nicht sagen, da ich im Büro bin, und meine Aufzeichnungen zuhause sind. Ich glaube aber es waren ca 5 Minuten.

Bei den Explanaten habe ich ca 2-3 cm Länge gewählt, wobei ich die Blattspitze nicht mehr verwendet habe, weil die zu weich fürs Agar war.

Ich denke man muss das ganze schon 3-4 mal gemacht haben um ein Gefühl dafür zu bekommen. Deshalb werde ich mich jetzt mal quer durch meine Sammlung versuchen. Da in den letzten Wochen viele ausgetrieben sind, habe ich genug junge Blätter zum Testen. Wenn mein titanum dann sein drittes Blatt treibt, habe ich dann hoffentlich schon genug gelernt, um mehr als ein erfolgreiches Explanat zu bekommen.



Hat hier evtl. sonst noch jemand Erfahrungen mit Mikrovermehrung?


Andreas

Zunächst zu deinen Fragen, BAP und NAA sind Pflanzenhormone oder Wachstumsregulatoren. Durch Zugabe von einem oder mehreren Hormonen kann man erreichen, dass vom Explanat z. B. Callus oder Wurzeln gebildet werden. Was passiert hängt von den Hormonen ab.

BAP - 6-Benzylaminopurine

NAA - 1-Naphthylessigsäure

Das MS Medium enthält Nährsalze. Es ist somit eine Düngerlösung. Siehe hier: http://de.wikipedia.org/wiki/Murashige-Skoog-Medium

Die Erfahrungen zeigen, dass die Sterilisation in der Mikrowelle meistens (nicht immer) ausreichend ist. Ich verweise da auf Carol Stiff, die im amerikanischen Raum seit Jahren Tissue Culture für den Hausgebrauch praktiziert und lehrt.

Ich selbst habe ein ca drei Monate altes Explanat, welches bisher keine Spuren von Kontaminierung zeigt. Hilfreich ist dabei sicher, dass dem Medium PPM zugesetzt wird, welches Kontaminierung vorbeugt. Siehe hier http://www.plantcelltechnology.com/about-ppm/

Wenn du dich mit dem Thema näher auseinander setzen möchtest, empfehle ich folgende Seiten:


http://tech.groups.yahoo.com/group/hometissueculture/
Meines Wissens nach die größte Community, die sich mit Tissue Culture beschäftigt.

http://www.kitchenculturekit.com/index.htm
Die Seite von Carol. Hier kann man auch das Zubehör kaufen.

http://www.amazon.de/Plants-Test-Tubes-I…from+test+tubes
Das Buch Plants from Test Tubes. Eine verständliche Anleitung und Einführung in das Thema.

Gruß
Andreas